© Biokomp i Göteborg AB
PCR, Polymerase Chain Reaction
för undersökning av hoppande gen i human-DNA
Referens: http://www.accessexcellence.org/AE/AEPC/DNA/detection.html
se även    http://vector.cshl.org/geneticorigins
Detta behöver du:
·        Mastermix för PCR som innehåller Taq-DNA-polymeras, nukleotider för  
      uppbyggnad av DNA och lämplig reaktionsmiljö bl a med avseende på 
      pH och konc av Mg2+
·        25 mM magnesium-acetat-lösning
·        Humant DNA 
·        Primerpar, korta DNA-strängar 20 – 25 baspar, som ska vara
      startbitar för den DNA sträng som ska amplifieras
·        DNA stege. 100 – 1000 bp
·        H2O extra rent

Programmera PCR apparaten enligt diagrammet

Utförande:
1.      Märk ett rör innehållande 10 µl mastermix med signatur
2.      Tillsätt 2,5 ml primer TPA1. Sätt droppen på rörets insida
3.      Tillsätt 2,5 ml primer TPA2. Sätt droppen på rörets insida
4.      Tillsätt 1ml 25 mM Mg2+-acetat
5.      Tillsätt 5 ml DNA-lösning
6.   Tillsätt 4 ml sterilt vatten 

Centrifugera snabbt ner dropparna i botten på röret.
Sätt ner rören i PCR-apparaten och starta genast programmet
Negativ kontroll: 
Tillsätt som ovan 1–4 men ersätt DNA lösningen med vatten dvs totalt 9 ml vatten

 

 

 

Resultat

Gör en elektroforetisk analys på agarosgel av det amplifierade DNA-fragmentet

7.   Gjut en gel med agaros-
      koncentration 1,5 % 
8.   Blanda 15 µl PCR-produkt med 
      3 µl ”loading buffer” och sätt på  gelen.

Sätt även storleksmarkör (stege) på gelen