© Biokomp i Göteborg AB

Elektrofores

 
 

 

 

 

Följande lösningar behövs:
Elektroforesbuffert (= TBE-buffert)

Stamlösning: 27 g Tris + 13,5 g Borsyra + 2,3 g EDTA löses i 0,5 l vatten Brukslösning:
Späd stamlösningen 10 ggr.

BFB-lösning: Lös 50 mg bromfenolblått i 20 ml 50%-ig glycerol

Etidiumbromidlösning: 5 mg/ml vatten

"Framkallningslösning" för DNA:
Tillsätt 10
ml Etidiumbromidlösning till 100 ml brukslösning TBE-buffert


Utförande

 

 

 

 

 

Laddning av proverna i gelen

 

Proverna behöver innehålla en tung vätska och något färgämne, som vandrar fortare än DNA-proverna.
Till provet sätts 1/4 volym BFB-lösning

Brunnarna i gelen rymmer 10 - 20 ml, beroende på storleken av kammens tänder och gelens tjocklek.

Elektroforesen körs med spänning 90 V eller lägre. Den avbryts då bromfenolbandet vandrat minst 3/4 av gelen eller till kanten av gelen.

Synliggörande av DNA i gelen med etidiumbromid Både gel och elektroforesbuffert används utan etidiumbromid.
Efter avslutad elektrofores läggs gelen i en plastlåda med brukslösning av TBE-buffert innehållande etidiumbromid.
Lämplig koncentration av etidiumbromid i framkallningsbad är 0,5 mg/ml (OBS! Handskar!)
Gelen får ligga där 10-20 min. Därefter framträder DNA-banden vid UV-belysning.